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本文標(biāo)題:"測(cè)量酶活性可用中止反應(yīng)試驗(yàn)-生物實(shí)驗(yàn)"

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測(cè)量酶活性可用中止反應(yīng)試驗(yàn)-生物實(shí)驗(yàn)

 
中止反應(yīng)法測(cè)定酶活性
 
    測(cè)量酶活性可用中止反應(yīng)法(Stoppedmethod)或連續(xù)反應(yīng)法中
止反應(yīng)法是將酶反應(yīng)按時(shí)即刻完全停止,取出反應(yīng)物或產(chǎn)物,于以
分離,再確定產(chǎn)物的生成量或反應(yīng)物的消耗量,算出酶活性。連續(xù)
反應(yīng)法無需取樣中止反應(yīng),而是在酶反應(yīng)過程中,用儀器來監(jiān)測(cè)反
應(yīng)進(jìn)行的情形,記錄結(jié)果,算出酶活性。連續(xù)法用一個(gè)樣品可以作
多次測(cè)定,使用方便,又極易查出動(dòng)力學(xué)的反應(yīng)級(jí)數(shù)。若是零級(jí)反
應(yīng),產(chǎn)物的量當(dāng)與酶活性成正比,可以立刻算出結(jié)果,但是很多酶
反應(yīng)卻無法使用連續(xù)法,而中止反應(yīng)法雖略感不便,幾乎任何酶都
可以用這種方法測(cè)量酶活性。
 
   中止反應(yīng)法  中止反應(yīng)法是在酶和底物的恒溫反應(yīng)過程中,在
到達(dá)各個(gè)予定的時(shí)間時(shí),取出定量的樣品,使酶立刻變性,不再反
應(yīng),然后測(cè)量反應(yīng)產(chǎn)物的生成量。由零時(shí)開始,產(chǎn)物的生成量至少
在開始階段的一兩分鐘內(nèi)應(yīng)形成直線形的增加,否則一定是測(cè)量錯(cuò)
誤,或反應(yīng)條件不對(duì),才會(huì)發(fā)生偏差。欲使酶變性,最常用的方法
是加入三氯乙酸或過氯酸使酶蛋白沉淀。
 

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