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本文標(biāo)題:"顯微鏡計(jì)數(shù)前需要用濾膜將一定體積的細(xì)胞濃縮"

發(fā)布者:yiyi ------ 分類: 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------ 人瀏覽過-----時(shí)間:2016-10-31 16:41:24

顯微鏡計(jì)數(shù)前需要用濾膜將一定體積的細(xì)胞濃縮

 
    當(dāng)需計(jì)數(shù)的樣品幾乎不含細(xì)胞或者細(xì)胞濃度非常低時(shí)(如灌裝
流水線上的葡萄酒),在顯微鏡計(jì)數(shù)前需要用濾膜(<0.45μm)將一
定體積的細(xì)胞濃縮。
    1.用9mL稀釋空白液和樣品充分混勻,準(zhǔn)備合適梯度的待測(cè)樣
品。
    2.將血球計(jì)數(shù)板上的蓋片蓋在計(jì)數(shù)槽上。
    3.如果計(jì)數(shù)前需要進(jìn)行細(xì)胞染色,必須將樣品和染色液混合
均勻。記錄體積和特定的稀釋參數(shù)。
    4.使用移液管將稀釋或未稀釋的樣品滴1滴于血球計(jì)數(shù)板上每
個(gè)待測(cè)表面的輸液槽(V形凹槽)內(nèi),通過毛細(xì)管滲透作用,蓋片下
的樣品溶液將均勻滲透入計(jì)數(shù)區(qū)域中。或者,將最終稀釋液直接滴
1滴于計(jì)數(shù)方格中,之后蓋上蓋片。盡管這種方法也可行,但蓋蓋
片時(shí)要非常小心,避免在計(jì)數(shù)區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)氣泡。另外,溶液未充滿
計(jì)數(shù)方格或者溢出計(jì)數(shù)槽都是不行的。
    5.使用顯微鏡時(shí),可以選擇40×或100×的物鏡放大倍數(shù),統(tǒng)
計(jì)足夠量的方格中的細(xì)胞數(shù),使細(xì)胞總數(shù)約600個(gè)。分別統(tǒng)計(jì)血球
計(jì)數(shù)板上的2個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)域的細(xì)胞數(shù),再相加取平均值。
    6.計(jì)算公式:原始樣品菌數(shù)(細(xì)胞個(gè)數(shù)/mL)=計(jì)數(shù)區(qū)域內(nèi)的平
均細(xì)胞數(shù)×用于計(jì)數(shù)的溶液體積×稀釋倍數(shù)
 

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