本文標題："熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長技術(shù)"
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熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長技術(shù)
如果最早一次的成像可行，那么在以后所有的GFP時延性實驗中
，采用已經(jīng)摸索出的設(shè)備參數(shù)，如掃描時間，激發(fā)水平和檢波器的
捕獲和篩檢，保持成像的一致性，或至少可以作為一個良好的起點
。8．設(shè)置圖像理想的像素大小。許多設(shè)備有可選擇的范圍(64像素
×64像素～2048像素×2048像素)。通常，每平方微米的像素越多
，影像就越清晰；然而，這些高像素的影像在同樣的像素設(shè)置時間
中需要更長時問的掃描，并且需要更多的儲存空間。記住為了使數(shù)
碼影像保持空問分辨率，應該調(diào)整像素的大小到每個可分解單元≥
2個像素。可分解單元(r)取決于物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長Q)
(r—o．61xz／NA)。9．為每個影像設(shè)置理想的掃描時間。像前面
提到的，研究進程的相對速度在一定程度上決定掃描時間。通過改
變像素設(shè)置時間(每個像素收集熒光的時間)改變總的掃描時間或者
平均一個像素所需要的時間(多次影像掃描后，單個像素收集的總
熒光除以掃描次數(shù))。簡單地說，改變掃描時間在本例中不會引起
差別。然而，如果使用平均像素，則應考慮到與畫面平均(重復掃
描整張影像)相對的線平均(用平均的像素重復掃描單一的像素線，
進行平均)與平均畫面。在活細胞中，熒光標記的蛋白質(zhì)可能正在
細胞中運動，而且平均畫面像素經(jīng)過掃描一整張影像所需要的時間
在不同的時間點被收集。這樣將會使熒光信號在比平常更大的范圍
內(nèi)丟失。
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