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本文標題:"熒光顯微鏡下觀察神經(jīng)原始細胞的特點"

發(fā)布者:yiyi ------ 分類: 行業(yè)動態(tài) ------ 人瀏覽過-----時間:2013-3-29 17:13:10

 熒光顯微鏡下觀察神經(jīng)原始細胞的特點

 
大鼠神經(jīng)原始細胞具有增生 (proliferation) 之特性:
 
在相位差顯微鏡之觀察下,培養(yǎng)的神經(jīng)原始細胞在第二天左右,
開始複制及增生,至第四天左右,這些細胞已經(jīng)形成一些小球,直到
第七天時,形成明顯的神經(jīng)細胞球 (neurosphere)
 
將培養(yǎng) 7 天后的神經(jīng)原始細胞,經(jīng)離心 600×g 5 分鐘,將上清液
去除,重新轉(zhuǎn)種 (passage),計數(shù)細胞數(shù)目,至第四次轉(zhuǎn)種 (即第五代),
神經(jīng)原始細胞具有複制及自我再生之能力
 
將神經(jīng)原始細胞球,置于事先以 poly-L-lysine 覆蓋之培養(yǎng)皿上,
用 nestin 抗體以免疫細胞染色法 (immunocytochemistry) 鑑識神經(jīng)原
始細胞,呈棕色的細胞即為神經(jīng)原始細胞 
 
這些具有染色的神經(jīng)細胞團表現(xiàn) nestin 免疫反應(yīng)性,由顯示這些細胞包含神經(jīng)表皮干
細胞之間質(zhì)性細絲蛋白質(zhì)構(gòu)造,而在分化之神經(jīng)細胞或膠質(zhì)細胞則并
不具有此特性。
 
將神經(jīng)原始細胞球,以綠色螢光蛋白 (GFP) 轉(zhuǎn)殖 (transfection)
入神經(jīng)細胞球內(nèi),以標示細胞并觀察型態(tài)學(xué),在濾鏡 FITC 螢光顯微
鏡下觀察可清楚地看出數(shù)十至數(shù)百顆細胞本體,以及細胞與細胞間的聯(lián)繫

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